JIDAM

       

 

REVIEW ARTICLE

 

eISSN 2582 - 0559 
“An Official Journal of IDA - Madras Branch”©2019. 
Available online 

22 

JIDAM/Volume:7/Issue:1/Pages 22 - 26/January - March 2020

 

ANALYSIS OF HERPES SIMPLEX VIRUS USING 

GINGIVAL CREVICULAR FLUID- A REVIEW 

Darini

.A, Dr. M.D.Abdul Rahim Akbar, Dr. Jabeen Fathima.G*, Dr. Ahmed Danish Rehan**, Dr.Pavithra.R.S , 

Dr.Velkumar.J  

Department of Periodontology, Ragas Dental College and Hospital, Uthandi, Chennai, Tamilnadu, India 

*Medical Microbiology, Government of Tamilnadu, Tamilnadu, India

**Department of Oral pathology and microbiology, Jawaharlal Nehru Institute of Medical Science, Imphal, Manipur, 

India. 

To access & cite this article 

Website: jidam.idamadras.com 

    DOI:10.37841/jidam_2020_v7_i1_04 

ADDRESS FOR CORRESPONDENCE: 
Dr. MD Abdul Rahim Akbar, MDS.,  
Associate Professor, Department of Periodontology, 
Ragas  Dental  College  and  Hospital,  Uthandi,  Chennai, 
Tamilnadu, India 
E mail: drakbarmds@gmail.com 

Received – 07.02.20 

Accepted – 05.03.20 

Published – 27.03.20 

ABSTRACT

 

    Oral  Herpes  is  a  viral  infection  caused  by  Herpes 

Simplex  Virus.  80%  of  Oral  Herpes  is  caused  by  HSV-1 
which  infects  the  skin  and/or  mucous  membranes  and 
produces  painful  sores  or  blisters  on  lips,  gums,  tongue, 
cheeks. The initial outbreak of virus strain can result in flu-
like  symptoms,  including  fever,  swollen  lymph  nodes  and 
body  aches.  If  not  found  in  initial  stages,  it  may  result  in 
systemic  disorders  like  diabetes  mellitus,  cardiovascular  or 
cerebrovascular diseases. The best solution to diagnose oral 
herpes  is  by  analyzing  Gingival  Crevicular  Fluid  (GCF) 
through  nested  Polymerase  Chain  Reaction  (PCR) 
technique.  In  periodontal  disease  pathogenesis,  the 
inflammatory  mediator  levels  present  in  gingival  crevicular 
fluid  represent  relevant  risk  indicators  for  disease  activity. 
Gingival  crevicular  fluid  (GCF),  a  serum  transudate  or 
inflammatory  exudate,  can  be  collected  from  the  gingival 
crevice  surrounding  the  teeth.  The  fluid  reflects  the 
constituents  of  serum,  the  cellular  response  in  the 
periodontium,  and  contributions  from  the  gingival  crevice. 
The  amount  of  GCF  is  directly  proportional  to  the  severity 
of  the  inflammation.  Now-a-days  several  methods  for 
collection  and  estimation  of  GCF  has  been  established. 
Hence, by analysing in this technique, the presence of HSV 
in  the  periodontium  before  the  onset,  at  the  time  of 
periodontitis 

initiation, 

and 

periodically 

during 

its 

development can be diagnosed. 

KEYWORDS

:  Herpes  virus,  Gingival  crevicular  fluid, 

inflammation, periodontitis 

23 

JIDAM/Volume: 7/Issue: 1/Pages 22 - 26/January - March 2020 

Darini et al: Analysis of Herpes Simplex Virus using GCF 

INTRODUCTION 

Oral  herpes is  an  infection  caused  by  Herpes  Simplex 

Virus. The virus causes painful sores on the lips, gums, tongue, 
roof  of  mouth  and  cheeks.  Herpes  Simplex  is  a  virus  with 
multiple  strains.  Two  of  these  strains:  HSV-1  and  HSV-2, 
cause  Oral  and  Genital  Herpes  respectively.  Herpes  viruses 
infect  the  skin  and/or  mucous  membranes.  Oral  herpes 
presents  as  cold  sores  or  fever  blisters. Approximately  80% 
of  Oral  Herpes  cases  are  caused  by  HSV-1,  while  the 
remaining 20 percent are caused by HSV-2, and 75%-80% of 
Americans carry atleast one strain of HSV (Type 1 or 2).  

GINGIVAL CREVICULAR FLUID 

Gingival  crevicular  fluid  (GCF),  a  serum  transudate 

or inflammatory exudate, can be collected from the gingival 
crevice  surrounding  the  teeth.  The  fluid  reflects  the 
constituents  of  serum,  the  cellular  response  in  the 
periodontium,  and  contributions  from  the  gingival  crevice. 
The  study  of  GCF  has  focused  on  defining  the 
pathophysiology of periodontal disease, and identification of 
a potential diagnostic test for active periodontitis.  

In  evaluating  the  pathogenesis  of  periodontal 

diseases, Gingival Crevicular  Fluid is a potential prognostic 
and  diagnostic  tool.  As  host  susceptibility  is  a  critical 
determinant  in  periodontal  disease  pathogenesis,  the 
inflammatory  mediator  levels  present  in  GCF  represent 
relevant  risk  indicators  for  disease  activity.  More  recently, 
GCF  metabolomics  appears  promising  as  an  additional 
diagnostic  method.  Omics  analyses  of  GCF,  measuring 
microbial and host interactions in association with the onset 
and  progression  of  periodontal  diseases,  still  show  the 
potential  to  expand  the  landscape  for  the  discovery  of 
diagnostic, 

prognostic 

and 

therapeutic 

markers. 

Inflammatory 

markers 

in 

GCF 

such 

as 

prostaglandins(PGE2),neutrophil 

elastase, 

lysosomal 

enzyme 

beta-glucuronidase, 

cytokines, 

chemokines, 

neuropeptides    assists  in  defining  the  impact  of  certain 
systemic  disorders  (e.g.,  diabetes  mellitus)  to  periodontal 
disease, and sustenance of a  periodontal disease/periodontal 
inflammation 

into 

certain 

systemic 

disorders 

(i.e., 

cardiovascular/cerebrovascular diseases). 

 

COMPOSITION OF GCF: 

I.

Cellular elements

a. Epithelial cells:  Fluid originating  from areas  with

more  severe  gingivitis  contained  a  much  higher  proportion 
of cells typical to the deepest epithelial layer. 

b. Leukocytes:  It  has  been  established  that  47%  of

somatic  cells  obtained  from  the  gingival  sulcus  were 
leukocytes,  whereas  the  presence  of  inflammatory  cells  in 
the  gingival  crevice  showed  98%  of  polymorphonuclear 
cells. The absolute number of cells increased proportionately 
with  the  intensity  of  inflammation,  whereas  the  differential 
count  was  95–97%  neutrophils,  1–2%  lymphocytes,  and  2–
3% mononuclear cells. 

c. Bacteria: Bacteria cultured from GCF were similar

to those found in the adjacent dental plaque electrolyte. 

d. Electrolytes: Some of these are sodium, potassium,

fluoride,  calcium,  iodine,  and  phosphorus.  Na:K  ratio  in 
GCF  is  3:9  as  opposed  to  its  ratio  of  28:1,  which  confirms 
that  the  fluid  passes  through  damaged  tissue  due  to 
accumulation of intracellular potassium from disrupted cells. 

II. Organic compounds

a.

Carbohydrates: Glucose hexosamine and hexuronic
acid  are  two  of  the  compounds  found  in  gingival
fluid.

b.

Proteins: The total protein content of gingival fluid
is much less than that of serum.

c.

Immunoglobulins:  The  total  immunoglobulin  in
GCF  does  not  correlate  with  disease  severity  or
progression and indeed may be lower at progressive
sites.

d.

Complement:  Complement  proteins  are  present  in
GCF  from  sites  with  inflammation  and  the  split
fragments  C3  and  factor  B  have  been  detected
during experimental gingivitis.

e.

Cytokines:  Interleukin-1  (IL-1)  and  tumor  necrosis
factor  alpha  (TNF-α)  are  produced  by  activated
macrophages  and  other  cells.  IL-1α  and  IL-1β  are
present in inflamed gingiva.

f.

Metabolic  and  bacterial  products:  Metabolic
products  such  as  lactic  acid,  amino  acid  such  as
hydroxyproline  and  prostaglandin  are  found  in
GCF.

III. Enzymes

a.

Proteolytic 

and

hydrolytic 

enzymes 

of 

inflammatory cell origin:

  Inflammatory  process  leads  to  the  release  of 

polymorphonuclear  neutrophils  or  leukocytes  (PMN), 
macrophages,  lymphocytes,  and  mast  cells.  The  lysosomes 
of these inflammatory cells contain destructive enzymes that 
degrade  the  bacterial  and  metabolic  byproducts  during  the 
process  of  phagocytosis.  These  enzymes  are,  however, 
capable of degrading gingival tissue components if released. 

b.

Collagenases:

These  are  a  part  of  matrix  metalloproteinase  family

that  degrades  collagen. 

They  are  synthesized  by 

macrophages,  neutrophils  and  fibroblasts  and  keratinocytes 
are  secreted  by  these  cells  as  latent  enzymes  when 
stimulated  by  some  bacterial  products  and  cytokines.  Total 
enzyme activity levels were significantly higher and enzyme 
inhibitor  levels  were  lower  at  diseased  sites  compared  with 
healthy or treated sites. 

c.

Cysteine proteinases:

Cathepsins  B,  L,  and  H  are  a  family  of  cellular  cysteine 
proteinases,  which  can  degrade  extracellular  components 
including  collagen.  They  act  at  acidic  pH  and  are 
particularly  active  during  bone  resorption.  They  are  also 
produced  principally  by  fibroblasts,  macrophages,  and 

24 

JIDAM/Volume: 7/Issue: 1/Pages 22 - 26/January - March 2020 

Darini et al: Analysis of Herpes Simplex Virus using GCF 

osteoclasts. Levels of Cathepsins B and C were significantly 
reduced following periodontal treatment. 

d. Aspartate proteinases:

Cathepsin D is found in gingival tissue, and GCF levels have 
been  shown  to  correlate  significantly  with  increasing 
gingival  inflammation,  probing  depth,  probing  attachment 
level and bone loss. 

e.

Elastase:

Active elastase can only occasionally be detected in gingival 
tissue  and  is  usually  seen  adjacent  to  junctional  epithelium 
where PMNs are migrating into the crevice or in granulation 
tissue at the advancing front of the lesion. 

f.

Tryptase:

Tryptase  activity  is  present  in  large  amounts  in  gingival 
tissue and in  small amounts in GCF and  has been  localized 
to  gingival  mast  cells.  Tryptase  stimulates  the  release  of 
collagenase  from  gingival  fibroblasts  and  in  inflamed 
gingival tissues. 

g.

Dipeptidyl peptidase II (DPP II):

It  is  active  at  acidic  pH,  and  DPP  IV,  which  is  active  at 
alkaline pH, are present in gingival tissue and GCF. 

h.

Myeloperoxidase, lysosome, lactoferrin:

Myeloperoxidase  is  a  potent  bacterial  enzyme  produced  by 
PMNs,  which  is  higher  at  periodontal  disease  sites  than 
healthy  sites,  whereas  lysosomes  are  found  in  body 
secretions  notably  tears  and  saliva  and  in  GCF.  Lactoferrin 
is  an  antibacterial  agent  produced  by  inflammatory  cells  in 
GCF. 

i.

Aspartate

aminotransferase 

and 

Lactate 

dehydrogenase:

Aspartate aminotransferase is confined to the cell cytoplasm 
that  is  released  by  dead  or  dying  cells,  whereas  lactate 
dehydrogenase  is  present  in  the  cytoplasm  of  erythrocytes, 
thrombocytes and leukocytes. 

IV. Markers of connective tissue degradation

   These  include  the  types  I,  III,  and  IV  collagen, 

proteoglycans,  hyaluronan,  fibronectin,  laminin,  and  bone-
specific proteins. 

V. Drugs in GCF

    Metronidazole  and  tetracycline  can  eliminate  tissue 

bacteria,  and  in  conjunction  with  scaling  and  root  planing, 
they 

suppress 

A. 

actinomycetemcomitans 

levels. 

Tetracycline in low doses inhibits the activity of collagenase 
and other collagenolytic enzymes. 

COLLECTION OF GINGIVAL CREVICULAR FLUID

 

       GCF  can  be  collected  by  using  absorbing  paper  strips, 
preweighed  twisted  threads,  micropipettes,  crevicular 
washings. 

ANALYSIS OF GINGIVAL CREVICULAR FLUID 

      The presence of viruses in GCF samples can be assessed 
by a nested PCR amplification technique. Paper strips are the 
most convenient and accurate method for gingival crevicular 

fluid  collection,  while  ELISA  can  be  considered  the  most 
conventional  method  for  the  diagnosis  of  biofluids.

1

  The 

multiplex  polymerase  chain  reaction  (PCR)  amplification 
technique  was  used  to  identify  viral  DNA  from  HSV.  GCF 
analysis  shows  increased  number  of  biomarkers  such  as: 
cytokines,  interleukins,  Tumor  Necrosis  Factors,  PTX3, 
certain  enzymes  which  indicates  underlying  disease 
condition.  Presence  of  specific  viral  infections  may  be 
confirmed by means of above-mentioned techniques with the 
help of viral DNA or RNA. 

FORMS OF HERPES: 

    HSV-1  can  recur  spontaneously  in  the  eye,  causing 

Ocular  Herpes,  which  can  be  serious  and  leading  to 
blindness.  Rarely,  HSV-1  can  spread  to  the  brain,  causing 
Herpes  Encephalitis,  which  leads  to  death.  Furthermore, 
HSV-1  is  also  the  usual  etiology  of  Herpes  whitlow,  an 
infection  on  the  finger.  "Wrestler's  Herpes"  or  Herpes 
gladiatorum is an infection on the chest or face. 

TRANSMISSION, SYMPTOMS AND 
COMMUNICABILITY OF ORAL HERPES: 

        Herpes 

Simplex 

Virus 

affects 

only 

humans. Mouth sores most commonly occur in children aged 1-
2 years, but they can affect people at any age and any time of the 
year. People contract herpes by touching infected saliva, mucous 
membranes,  or skin.  Because  the  virus  is  highly  contagious, 
most  people  have  been  infected  by  atleast  one  herpes subtype 
before adulthood.  Oral  Herpes  is  most  transmitted  by  kissing 
or sharing drinks or utensils but can also be contracted from a 
partner who has genital Herpes during oral sex. HSV-1 and 2 
can  be  contracted  from  infected  bodily  fluids,  including 
semen, vaginal fluid, saliva, or herpes lesions, sores or blister 
fluid. Upon entering a cell, the infection often does not cause 
any  symptom.  The  initial  outbreak  of  the  virus  strain  can 
result  in  flu-like  symptoms,  including  fever,  swollen  lymph 
nodes,  muscle and body aches. If the  virus destroys  the  host 
cell  during  replication,  sores  or  blisters  filled  with  fluid 
appear. Scabs form over the sores or blisters once the fluid is 
absorbed, then the scabs disappear without scarring. 

     The herpes virus goes through dormant phases where 

it  becomes  inactive  for  indeterminable  periods  of  time  and 
reactivate  unpredictably.  Herpes  can  be  transmitted  even 
when  signs  or  symptoms  are  not  present.  This  process  is 
known  as  “shedding”  and  occurs  when  cells  that  have  the 
active  virus  are  dropped  or  shed  from  the  skin. 
Approximately  one-third  to  half  of  all  shedding  occurrences 
is  asymptomatic.  After the herpes virus infects, it  has a  unique 
ability to proceed through 3 stages:   

(i) Primary  infection:  The  virus  gains  entry  via  the  skin  or
mucous membrane and reproduces. During this stage, oral sores
and  other  symptoms,  such  as  fever,  may  develop.  People
suffering  from  oral  Herpes  may  also  experience  itching,
burning or tingling around the mouth or lips. Before the first
blisters  or  cold  sores  appear,  individuals  infected  with  the
virus  may  also  experience  flu-like  symptoms  including  sore

25 

JIDAM/Volume: 7/Issue: 1/Pages 22 - 26/January - March 2020 

Darini et al: Analysis of Herpes Simplex Virus using GCF 

throat,  fever,  swollen  glands  and/or  pain  when  swallowing. 
This is called asymptomatic infection, occurs twice as often as 
the disease with symptoms. 
(ii) Latency: From the infected site, the virus moves to a mass
of  nervous  tissue  in  the  spine  called  the  dorsal  root  ganglion,
where the virus reproduces again and becomes inactive.
(iii) Recurrence:  When  one  encounters  certain  emotional  or
physical  stress,  the  virus  may  get  reactivated  and  cause  new
sores and symptoms.

DIAGNOSTIC METHODS FOR HERPES DETECTION 

        The presence of viruses in GCF samples can be assessed 
by  nested  PCR  amplification  technique  or  quantitative  real 
time  PCR,  while  ELISA  can  be  considered  the  most 
conventional  method  for  the  diagnosis  of  biofluids.  HSV  1 
and HSV 2 in the blood is tested using the  Enzyme-Linked 
Immuno  Sorbent  Assay  (ELISA).  This  test  is  highly 
sensitive  and  will  detect  the  presence  of  HSV  antibodies  in 
the bloodstream. These antibodies have a development period 
of  2  weeks  to  6  months  after  initial  infection  that  can  be 
detected through ELISA test. This period varies from person 
to person. Petrovic et al recommends tests to be done for both 
Herpes  type  1  and  type  2  atleast  4-6  weeks  after  potential 
exposure.

  2 

The  multiplex  polymerase  chain  reaction  (PCR) 

amplification technique was used to identify viral DNA from 
HSV. 

TREATMENT FOR HERPES 

   There is no cure for Oral or Genital herpes, but there 

are treatment options.  Avoiding oral sex or  kissing someone 
with  herpes  can  help  prevent  the  spread  of  herpes.  The  first 
herpes  symptoms  after  infection  may  also  go  away  on  their 
own  after  10-14  days,  although  the  infection  itself  remains 
dormant  in  the  body.  Antiviral  medications,  such  as 
acyclovir,  famcyclovir,  and  valacyclovir  are  the  most 
effective  medications  available  which  reduces  the  severity 
and  frequency  of  symptoms,  however  they  cannot  cure  the 
infection. 

DISCUSSION

 

   An  etiopathogenic  role  for  Herpes  virus  has  been 

suggested  for  chronic  periodontitis,  aggressive  periodontitis, 
periodontal  abscess,  periapical  abscess  and  periimplantitis.

  3

 

The  present  study  evaluates  the  presence  of  HSV  in  GCF 
which further enhances the destruction of periodontium. This 
study  is  in  accordance  with  previous  studies

4

  and  describes 

the  prevalence  of  HSV  1  being  significantly  higher  in 
gingivitis  and  chronic  periodontitis  patients.  The  results 
produced  significant  reduction  in  Herpes  virus  levels  after 
Phase  I  therapy  and  this  finding  was  in  accordance  with  the 
study by Grenier et al.

 5 

Reduction of HSV 1 population after 

Phase  I  periodontal  therapy  can  be  attributed  to  a  reduced 
influx  of  HSV  1  infected  cells,  resolution  of  gingival 
inflammation  and  reduction  in  pocket  depth  due  to  tissue 
shrinkage.  It  was  found  that  number  of  herpes  virus  species 
increased  significantly  with  an  increasing  severity  of  all  the 
clinical parameters. Patients with coinfection by two or three 

herpes  viruses  exhibited  significantly  more  periodontal 
destruction than patients containing one or no herpes viruses. 
Previous  studies  of  aggressive  periodontitis  have  also  found 
an association between herpesvirus coinfection and increased 
gingival bleeding and probing depth.

 6

 Herpes  viruses  may  contribute  to  the  progression  of 

periodontitis  through  several  mechanisms.  It  is  assumed  that 
these  viruses  can  express  cytopathogenic  effects,  immune 
evasion,  immunopathogenicity,  latency,  reactivation  and 
tissue  tropism.

  7

  They  can  infect  or  alter  structural  cells  and 

host defense cells in the periodontium, and thereby reduce the 
ability  of  periodontal  tissues  to  resist  bacterial  insults.

  8

 

Results showed a high prevalence of HSV 1 in GCF (35.8%) 
which  is  in  accordance  with  some  authors  who  reported  a 
high  prevalence  of  this  virus  in  specimens  taken  with  paper 
points  plaque  samples  of  periodontal  pockets.

  9

  Contrary  to 

the results, Nibaliet al

10

  found a lower prevalence of HSV 1 

in  both  patients  with  periodontitis  and  healthy  controls.  On 
the  other  hand,  Grenier  et  al

11

  reported  higher  prevalence  of 

HSV 1 in patients with periodontitis than in healthy controls. 
Parra and Slots

12

 also found statistically higher prevalence of 

HSV 1 in patients  with chronic periodontitis than in patients 
with  mild  gingivitis.  Similar  results  were  inferred  by 
Contreras et al

8

 in gingival tissue specimens. Bilichodmath et 

al

13 

found  higher  prevalence  of  HSV  1  in  patients  with 

chronic  periodontitis  than  in  patients  with  aggressive  form, 
but  the  results  were  based  on  patient's  age.  Herpes  viruses 
particularly  HSV  1  play  a  potential  role  in  pathogenesis  of 
some  oral  diseases.  Higher  evidence  of  HSV  in  Nigerian 
malnourished  children  with  ANUG  is  found

14

.  The 

hypothesis is that herpes viruses can affect the host's immune 
system,  facilitating  the  development  of  secondary  bacterial 
infections. 

CONCLUSION 

The  presence  of  HSV-1  in  the  GCF  is  related  to  the 

degree of tissue destruction in patients with periodontitis. The 
confirmation  of  the  role  of  HSV-1  in  the  pathogenesis  of 
periodontitis  requires  a  larger  sample  along  with  a 
prospective  study  that  would  detect  the  presence  of  HSV  in 
the periodontium before the onset, at the time of periodontitis 
initiation,  and  periodically  during  its  development.  Also, 
future studies demonstrating the role of HSV infection in the 
pathogenesis of periodontitis should prove that eradication of 
viral  infection  can  prevent  the  progression  of  periodontal 
destruction. 

FINANCIAL SUPPORT AND 
SPONSORSHIP: 

Nil 

CONFLICTS OF INTEREST: 

There are no conflicts of interest. 

26 

JIDAM/Volume: 7/Issue: 1/Pages 22 - 26/January - March 2020 

Darini et al: Analysis of Herpes Simplex Virus using GCF 

REFERENCES: 

1.

Rucha  Shah

.

  Prevalence  of  herpesviruses  in  gingivitis

and  chronic  periodontitis:  relationship  to  clinical
parameters  and  effect  of  treatment.  J  Indian  Soc
Periodontol 2016;20(3).

2.

Sanja Matić Petrović, Detection of Herpes Simplex Virus
Type  1  in  Gingival  Crevicular  Fluid  of  gingival
sulcus/periodontal  pocket  Using  Polymerase  Chain
Reaction 2014;142(5-6):296-300.

3.

Ferreira  DC.  Viral-bacterial  associations  in  acute  apical
abscesses.  Oral  Surg  Oral  Med  Oral  Pathol  Oral  Radiol
Endod 2011;112(2):264-71.

4.

Patrícia  Maria  de  Sousa  Rodrigues

.

  Are  herpes  virus

associated  to  aggressive  periodontitis?  A  review  of
literature. J Oral Maxillofac Pathol 2015;19(3):348–355

5.

Grenier  G.  Detection  of  Herpetic  viruses  in  Gingival
Crevicular  Fluid  of  patients  suffering  from  periodontal
disease:  Prevalence  and  effect  of  treatment.  Oral
Microbiol Immunol 2009;24:506-9.

6.

Ling LJ. Association between human herpes viruses and
the 

severity 

of 

periodontitis. 

J 

Periodontol

2004;75:1479–85.

7.

lots J. Herpesviruses in periodontal diseases. Periodontol
2000. 2005; 38(1):33-62.

8.

Contreras  A.  Herpesviruses  in  periodontal  pocket  and
gingival  tissue  specimens.  Oral  Microbiol  Immunol
2000;15(1):15-8.

9.

Contreras  A.  Typing  of  herpes  simplex  virus  from
human 

periodontium. 

Oral 

Microbiol 

Immunol

2001;16(1):63-4.

10. Nibali  L.  Low  prevalence  of  subgingival  viruses  in

periodontitis 

patients. 

J 

Clin 

Periodontol

2009;36(11):928-32.

11. Grenier  G.  Detection  of  herpetic  viruses  in  gingival

crevicular  fluid  of  patients  suffering  from  periodontal
diseases:  prevalence  and  effect  of  treatment.  Oral
Microbiol Immunol 2009;24:506-9.

12. Parra  B.  Detection  of  human  viruses  in  periodontal

pockets using polymerase chain reaction. Oral Microbiol
Immunol 1996;11(5):289-93.

13. Bilichodmath  S  et  al.  Herpesviruses  in  chronic  and

aggressive periodontitis patients in an Indian population.
J Oral Sci 2009;51(1):79-86.

14. Contreras  A  et  al.  Human  Herpes  viridae  in  acute

necrotizing  ulcerative  gingivitis  in  children  in  Nigeria.
Oral Microbiol Immunol 1997;12(5):259-65.